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懸浮細(xì)胞如何固定做免疫熒光等后續(xù)實(shí)驗(yàn)?

更新時(shí)間:2023-10-21   點(diǎn)擊次數(shù):2745次

懸浮細(xì)胞呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)生長(zhǎng),如何固定?是所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)的第一步,也是關(guān)鍵的一步,也是難倒很多人的的一步。靶點(diǎn)科技懸浮細(xì)胞專(zhuān)用固定玻片Shi-Fix,提供全新的痛點(diǎn)解決方案。L-多聚賴(lài)氨酸等傳統(tǒng)老掉牙的作坊式方法被詬病,被淘汰。

您是否希望懸浮細(xì)胞的免疫熒光像貼壁細(xì)胞一樣容易?現(xiàn)在就是這樣!靶點(diǎn)科技Shi-Fix懸浮細(xì)胞免疫熒光專(zhuān)用玻片直擊痛點(diǎn)。

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究,相互作用研究和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。細(xì)胞免疫熒光就是將免疫學(xué)方法和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,研究特異性抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布。細(xì)胞免疫熒光特性高,敏感性強(qiáng),速度快,主要原理也是利用抗原抗體反映抗原抗體結(jié)合后再用熒光標(biāo)記,通過(guò)顯微鏡下觀(guān)察來(lái)確定某種特異性抗原是否存在。

根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型,可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞(淋巴細(xì)胞,血液的白細(xì)胞)。貼壁細(xì)胞有天然貼壁的屬性,而懸浮細(xì)胞不依賴(lài)支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)前提就是讓細(xì)胞能固定在玻片上。懸浮細(xì)胞如何貼壁或者固定到玻片上,是業(yè)內(nèi)科研人員面對(duì)的一個(gè)難題。傳統(tǒng)上,或用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接涂片法制備細(xì)胞涂片,然后把細(xì)胞片于乙醇或丙酮或多聚甲醛固定。無(wú)論甩片還是涂片,都是黑盒子實(shí)驗(yàn)。每個(gè)人操作手法不一樣,即使同一個(gè)人操作,每一批實(shí)驗(yàn),也都沒(méi)法評(píng)價(jià)細(xì)胞片上的細(xì)胞固定的情況,而這一步至關(guān)重要。盲目而又沒(méi)底的只能硬著頭皮往下做。浪費(fèi)的不僅是時(shí)間,還有抗體等很多試劑。如何解決這些痛點(diǎn)?懸浮細(xì)胞免疫熒光專(zhuān)用玻片Shi-Fix Coverslips帶來(lái)痛點(diǎn)解決方案!

您是否希望懸浮細(xì)胞的免疫熒光像貼壁細(xì)胞一樣容易?現(xiàn)在就是這樣!

靶點(diǎn)科技Shi-fix玻片允許懸浮細(xì)胞分層或直接作為單層生長(zhǎng)。簡(jiǎn)單,無(wú)憂(yōu)的實(shí)驗(yàn)方案,無(wú)需離心即可將懸浮細(xì)胞固定到載玻片上。只需將細(xì)胞添加到載玻片上,等待30分鐘,用PBS洗滌未結(jié)合的細(xì)胞并繼續(xù)免疫染色(或繼續(xù)培養(yǎng)以獲得所需的細(xì)胞密度)。

這些玻片也可用于染色懸浮細(xì)胞以進(jìn)行顯微鏡檢查,或用于固定懸浮細(xì)胞以進(jìn)行共聚焦顯微鏡檢查。更重要的是,如果需要,您還可以在細(xì)胞附著在玻片上時(shí)刺激它們。您可以像貼壁細(xì)胞一樣處理非貼壁細(xì)胞!


簡(jiǎn)單四步法固定懸浮細(xì)胞

1. 使用 PBS 清洗細(xì)胞,并將細(xì)胞重新懸浮于 PBS 中(2-5 百萬(wàn)個(gè)/ml)

2. 把懸浮細(xì)胞專(zhuān)用免疫熒光玻片放置于12孔或者6孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔里,直接滴加細(xì)胞于懸浮細(xì)胞專(zhuān)用免疫熒光玻片上(每個(gè)玻片上 20-30 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)

3. 使細(xì)胞附著30分鐘,有些細(xì)胞需要延長(zhǎng)附著時(shí)間,但不要超過(guò)1小時(shí)。使用約 2ml PBS沖洗掉未結(jié)合細(xì)胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上的細(xì)胞,可將 PB滴加于板孔側(cè)邊,然后輕輕搖晃 3-5分鐘)

4. 在顯微鏡下檢查細(xì)胞附著情況,如果需要進(jìn)一步培養(yǎng),那么加入 1ml培養(yǎng)基即可;若不培養(yǎng)即可直接固定,染色。



懸浮細(xì)胞固定免疫熒光圖


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